Микроклонирование - это реальная альтернатива среди традиционных методов размножения растений. Оно позволяет получать взрослые растения из малых частей, т.к. часть стебля, сегмент листа или корня, выращенные в асептическом (отсутствие микроорганизмов) контейнере с возможностью полного контроля среды. Получаемые растения полностью идентичны растениям - родителям. Выращивание «in vitro» производится в лабораторных условиях, но при соблюдении некоторых требований данные эксперименты могут быть успешно осуществлены у вас дома.
Оборудование, необходимое для выращивания культуры «in vitro»:
1. Стерильное помещение, в котором будут производиться все операции. Идеально может подойти аквариум 50/40/40.
2. Духовой шкаф для стерилизации посуды, инструмента и т.д.
3. Стеклянные или пластиковые контейнеры с крышками, обладающие достаточной термостойкостью
4. Скальпель и шипцы
5. Офисная бумага формата А4
6. Спиртовка
7. Аэрозоль, содержащий 70% спирта для обработки поверхностей
8. Хлоросодержащее дезинфицирующее средсто для обработки растений
9. Дезинфицирующее средство для рук
10. Питательная среда для растений
Приготовление питательной среды
Традиционно в роли питательной среды выступает среда MS (Мурасиге-Скуга), которую можно приобрести в некоторых химических компаниях. Но также можно самостоятельно приготовить подходящую питательную среду. Все составляющие широко доступны:
1. 2 чашки кипяченной воды
2. 1 часть сахарного песка
3. Разведенное удобрение ( половина от нормы NPK 10/10/10 в 1 литре воды)
4. Таблетка Иноситола 250 мг.
5. ½ таблетки мультивитамина ( с тиамином)
6. 4 части агара
Это базовая среда. Для приготовления среды в целях мультипликации и укоренения необходимо добавить ½ часть кокосового молока и ½ чайной ложки солода. В итоге на нужно получить среду с Ph в диапазоне от 5 до 6. Если то не так, то необходимо добиться этих показателей путем подкисления (лимонная кислота) или подщелачивания (пищевая сода). Смешайте все перечисленные компоненты в кастрюле и варите на медленном огне до растворения агара. Затем разлейте получившуюся жидкость по подготовленным емкостям (примерно по 2 см.). Закройте емкости и поместите их в духовой шкаф на 15 минут для стерилизации.
Стерилизация инструментов и другого оборудования
Щипцы и скальпели могут стерилизоваться, будучи обернутыми в фольгу в духовом шкафу в течение 15 минут. Также их можно стерилизовать в хлорной жидкости или в спирте с последующим прокаливанием над огнем.
Стерильная вода необходима для того, чтобы ополаскивать растение, а стерильная бумага для того, чтобы его можно было просушить.Вода может стерилизоваться в стеклянных емкостях. Бумага в бумажном пакете стерилизуется паром в духовом шкафу над водой.
Стерлизация растительного материала
Весь материал необходимо стерилизовать в хлоросодержащей жидкости (подойдет отбеливатель)+ 3/4 воды + 1 часть моющего средства, которое снизит поверхностное натяжение ). Стерилизация занимает 10-20 минут. Производите периодическое взбалтывание. Этот процесс убьет бактерии и грибы. При более длительном отмачивание может произойти отмирание растительной ткани, будьте внимательны. Промойте растение дважды в стерильной воде.
Операции в стерильном помещение
К последующим операциям необходимо подойти с особым вниманием, чтобы не позволить микроорганизмам помешать вашей работе:
1. Спрячьте волосы, засучите рукава и удалите часы и другие драгоценности. Вымойте свои руки дезинфицирующим средством, подходящим для кожи. Наденьте стерильные перчатки.
2. Стерилизуйте внутреннюю часть аквариума спиртовым аэрозолем и вытрите стерильной бумагой.
3. Расставьте все инструменты которые понадобятся вам в работе.
4. Работая в аквариуме, возьмите стерильный растительный материал из емкости с помощью щипцов. Стерилизуйте свои инструменты, опуская их в алкоголь между каждой операцией. Допускается использование стебля с небольшими листочками, если листья большие их следует укоротить. В каждый контейнер помещают по одной части матерала. Затем контейнеры плотно закрывают крышкой и ставят в слегка освещенное место на месяц. В течение этого времени некоторые растения могут погибнуть из-за обработки хлором, некоторые будут заражены микроорганизмами, а некоторые начнут быстро расти в стерильных контейнерах. От зараженных растений необходимо избавиться.
Мультипликация
В течение месяца выжившие растения заметно выросли и их необходимо пересадить на среду, содержащую кокосовое молоко. Кокосовое молоко содержит вещества, способствующие быстрой сегментации и мультипликации растения. При пересадке растения необходимо повторить все вышеперечисленные операции, за исключением обработки растения хлоросодержащей жидкостью. Операции проводятся в стерильном аквариуме на влажной стерильной бумаге. Влажность необходима для растения, которое является достаточно мягким и может быстро высохнуть.
Формирование корня
Как только растение достигло как минимум 2 см в высоту можно начать процесс укоренения. Растение по привычной схеме пересаживается в среду из кокосового молока и солода. судно культуры. Корни формируются в течение двух - четырех недель.
Пересадка в почву (акклиматизация)
На данном этапе подготовленные горшки заполняют стерильной почвенной смесью без добавления удобрений. В почве делают небольшое углубление.
С помощью пинцета достают растение из контейнера и отмывают теплой водой остатки агара с корней. Растение помещают в углубление, увлажняют из распылителя и накрывают горшок прозрачным колпаком. Постепенно приучайте растение к окружающей среде, периодически снимая колпак. Акклиматизация происходит в течение 4-6 недель. Затем переходят к привычном методам выращивания.
