СПОСОБ УСТРАНЕНИЯ МОЗАИКИ ИЗ КУЛЬТУР ПОБЕГОВ ИНЖИРА МЕТОДОМ ТЕРМОТЕРАПИИ
Р. Гелла
Унидад de Fruticultura
Сайт servicio де investigación сельскохозяйственный живая музыка генерал де Арагон Apdo. 727. 50080 Сарагоса
Испания
Ж. А. Марин
Унидад де Помология
Эстасьон Экспериментальных "Аула Деи"
Consejo Superior de Investigaciones Cientificas Apdo. 202. 50080 Сарагоса
Испания
М. Лопес Корралес и Ф. Торибио
Сайт servicio де investigación развития технологического хунта де Эстремадура. Финка "Ла-Ордене" Apdo.22.06080 Бадахос
Испания
Дополнительные индексные слова: Ficus carica L., наконечник побега, мозаичный вирус, термотерапия Аннотация
Верхушечные почки (0,5-0,7 см) фигового дерева (Ficus carica L.) cvs. "Urdana", "Napolitana", "Tiberio" и "Villalba" с явными мозаичными симптомами культивировали в твердой среде MP (Pontikis and Melas, 1986), а затем подвергали чередующемуся высокотемпературному режиму с 16 ч света (5.000 люкс) при 37°C с последующим 8 ч темноты при 34°C. Эти методы in vitro привели к тому, что растения инжира без внешних симптомов болезни инжира-мозаики после года выращивания в горшке в теплице. Начиная С Ф. Карика толерантна к высокотемпературным обработкам, in vitro термотерапия с чередованием температур является подходящим методом для устранения фиговой мозаики. Этот способ позволяет получать большое количество обработанных наконечников побегов с высокими показателями выживаемости и регенерации. Индексация показала отсутствие болезни фиговой мозаики у всех растений, полученных при данной обработке.
1. Введение
Фиговое дерево (Ficus carica L.) является типичным видом средиземноморских стран. В последние годы, в результате нынешнего кризиса в сельском хозяйстве и растущего спроса на разнообразие сельскохозяйственной продукции со стороны потребителей, этот вид был рассмотрен как потенциальная альтернативная плодовая культура для некоторых сельскохозяйственных районов Испании. Однако создание новых коммерческих садов требует изучения различных аспектов, таких как растительный материал, методы размножения, обрезка, удобрение, сохранение свежих фруктов и т. д. который уже был инициирован (Toribio, 1993). Другим из этих аспектов может быть санитарный отбор, поскольку инжир подвержен мозаике инжира, эндемическому заболеванию, которое широко распространено в большинстве сортов и стран, где выращивают инжир. Это заболевание, впервые описанное Condit and Home в 1933 году, в основном поражает листья, молодые ветви и плоды. Симптомы выражаются в виде очень явных мозаичных поражений на листьях. Эти поражения могут также проявляться в виде диффузных участков хлороза, часто с четко выраженными краями. Кроме того, это заболевание вызывает искажения формы листьев и уменьшение площади листьев (Casalicchio, 1964). Поскольку нет полевых обработок, наиболее эффективной стратегией является производство здоровых растений для посадки в новых коммерческих садах. Кроме того, производство здоровых растений также позволяет изучить, как фиговая мозаика влияет на производство, качество плодов и сохранение.
Хотя успех зависит от многих факторов (Nemeth, 1986), термотерапия - высокотемпературные процедуры (35-37 °C) в течение определенных периодов времени - была применена во многих видах против вирусов в древесных растениях. По этой причине, разные авторы использовали в
система vitro для получения здоровых растений видов, чувствительных к высоким температурам, таких как вишня (Snir and Stein, 1985; Deogratias et al., 1989; Гелла и соавт., 1995) или персик (Stein et al., 1991).
Здоровые растения инжира были получены с помощью традиционной термотерапии, но были проблемы с регенерацией растений (Martelli, 1966; Savio, 1978). Позже, Muriithi и соавт., (1982) пытались производить растения без мозаики, способствуя удлинению вершин, разработанных in vitro под традиционной термотерапией, без микроразмножения полученного материала. Понтикис и Мелас (1986) размножали побеги инжира, но не изучали санитарное состояние.
В настоящем исследовании были установлены культуры побегов инжира, инфицированные фиг-мозаикой, с целью получения фиг без мозаики с помощью терапии in vitro. Данное исследование включало культивирование in vitro верхушек побегов, полученных в процессе обработки, микроразмножение регенерированных побегов, укоренение, акклиматизацию и индексирование растений.
Материалы и методы
Растения
Фиг древовидных растений с явными симптомами мозаики резюме. "Урдана", "Наполитана", "Тиберио" и "Вильяльба" размножались лиственными черенками и выращивались в горшках в тепличных условиях. Эти растения были использованы в качестве исходных растений для размножения in vitro.
In vitro распространение и тепловая терапия
Верхушечные почки (0,5-0,7 см) стерилизовали в растворе гипохлорита натрия (5 гр.1-1 доступного КЛ) и 0,01% Твина-20 в течение 20 мин и промывали 4 раза в стерильной дистиллированной воде.
Почки культивировали в твердой среде (МП), описанной Pontikis и Melas (1986). Посевные культуры выдерживали в камере с контролируемой средой при 22 ± 2°с с интенсивностью света 2.500-3.000 люкс и длительным дневным фотопериодом (16 ч света/ 8 ч темноты). Побеги подкармливали каждые 4 недели и переносили на свежую среду каждые 4 недели в течение 8 месяцев.
Термообработке подвергали растительный материал в культуре тканей: микрорезки (1,5-2 см) с 2 или 3 аксилярными и лишенными терминальной вершины подвергали следующему чередующемуся температурному режиму: 16 ч светлому (5.000 люкс) при 37°С с последующим 8 ч темному при 34°С.
Термическая обработка была закончена, когда побеги начали проявлять высокие температурные эффекты (хлоротичные листья, низкий рост побега, некротические кончики и т. д.).). В этот момент наконечники (1-2 мм), разработанные в рамках этих обработок, были иссечены и культивированы in vitro на среде MP.
Укоренение и акклиматизация
Способность к укоренению in vitro и ex vitro микрорезов фиг (Ficus carica L.) ранее изучалась в нашей лаборатории с целью установления наиболее эффективного метода (Lopez Corrales and Gella, 1994). Укоренение Ex vitro проводили в теплице: микрорезки (2-2, 5 см) помещали непосредственно в соцветия с субстратом в отсутствие гормонального раствора. Сразу же после этого они были покрыты пластиковым туннелем, который открывался ежедневно в течение увеличивающихся периодов времени. После развития корней (4 недели) растения пересаживали в большие горшки, содержащие торф и вермикулит (1: 1).
2.4. Индексирование
Наличие или отсутствие мозаики фиг в растениях, полученных после терапии in vitro, было количественно определено протоколом индексирования, разработанным для этого вида (Lopez Corrales, 1996). Этот протокол заключается в чип почкования в безвирусных индикаторных растений, которые были получены из семян cv. "Тиберио" и размножается in vitro. Температура и два последовательных сокращения были двумя наиболее важными факторами, которые должны были быть оптимизированы, чтобы получить по крайней мере 60% коэффициента передачи симптома в индикаторные растения.
Индексирующие блоки состояли из: 5 индикаторных растений, привитых кусочком коры только от одного термообработанного растения. В качестве положительного контроля использовали 5 индикаторных растений при каждой из трех обработок, инокулированных кусочком коры фиг мозаики инфицированных растений. Отрицательный контроль состоял из 5 индикаторных растений, инокулированных их корой, каждой из 3 обработок.
Результаты
Культура in vitro и тепловая терапия
Растения фигового дерева легко культивировались in vitro, хотя некоторые фенольные соединения появились на основе эксплантов во время создания культуры.
Через 15 дней после термотерапевтических обработок побеги различных сортов показали хорошие результаты, так как наблюдались листья интенсивной зеленой окраски, размножение побегов и развитие пазушных почек. После этого побеги становились хлоротичными и скорость роста быстро снижалась.
Все сорта оказались толерантными к тепловой терапии, и не было никакой разницы в толерантности между сортами. В общем, побеги с плохими аспектами и небольшой энергией более чувствительны к термотерапии.
Количество дней обработки было большим для всех сортов.
В конце термообработки кончики побегов (1-2 мм), вырезанные из культуры ткани инжира, имели бледно-зеленый цвет, но когда они начинали расти, листья проявляли глубокий зеленый цвет и большую выживаемость в течение первой субкультуры (Таблица 1)
Был получен высокий процент укоренения и акклиматизации ex vitro, а растения имели высокое качество и нормальный внешний вид.
Ни у одного из регенерированных растений не было симптомов фиговой мозаики после года в горшках в теплице.
Индексирование
Протокол индексации показал отсутствие фиговой мозаики во всех растениях, полученных при термотерапии.
Обсуждение
Это исследование показывает, что культивируемые в пробирке побеги инжира устойчивы к длительным термическим обработкам. Кроме того, in vitro культура наконечников, вырезанных после термотерапии, является хорошим методом регенерации растений из-за их способности к микроразмножению.
Этот метод дал лучшие результаты, чем те, которые использовали Мартелли ( 1966) и Савио (1978). Это более простой метод, чем традиционная термотерапия, с очень высокой выживаемостью посевных культур. Кроме того, культура in vitro позволяет контролировать определенные факторы (такие как температура, Освещение и влажность), которые влияют на успех регенерации растений. Барба и соавт. (1992) регенерировали растения сливы и персика после термотерапии in vitro культурой кончиков, но они получили низкую укореняемость и снизили здоровые показатели растений.
In vitro термотерапия с переменным температурным режимом (16 ч свет при 37°С с последующим 8 ч темно при 34°С) была эффективным методом и привела к элиминации
фиговой мозаики и большей выживаемости побеговых культур. Этот температурный режим был успешно применен к побеговым культурам зараженных PNRSV вишен (Gella et al., 1995).
Для инактивации PNRSV в культивируемой ткани Prunus persica L. использовали переменные температуры (Stein et al., 1991). Однако у других видов (Musa acuminata ) постоянно высокий температурный режим был более эффективен против других вирусов (Wu and Su, 1991).
MarinJ_ActHort_1998.jpg 38.98К
0 Количество загрузок:
